3种秋眠类型苜蓿对不同CO2浓度的生理响应
翟晓朦1, 王铁梅2, 关潇1, 张晓波3
1.中国环境科学研究院 环境基准与风险评估国家重点实验室,北京 100012
2.北京林业大学林学院,北京 100083
3.海南大学旅游学院,海南 海口 570228
通讯作者:关潇(1978-),女,山西怀仁人,副研究员,博士,研究方向为遗传资源与生物安全。E-mail:[email protected];张晓波(1978-),男,山西岢岚人,博士,副教授,研究方向为草坪管理。E-mail:[email protected]

第一作者:翟晓朦(1990-),女,江苏兴化人,助理研究员,硕士,研究方向为草地资源的研究与利用。E-mail:[email protected]

摘要

利用开顶式气室(open-top chamber,OTC)研究了3种秋眠类型苜蓿( Medicago sativa)(秋眠型苜蓿Maverick、半秋眠型苜蓿ABI700和极非秋眠型苜蓿UC-1465)在700、550和350 μmol·mol-1(CK)3种CO2浓度处理下整个生育期的生理变化。结果表明,整个生育期CO2浓度越高,苜蓿叶绿素和可溶性糖含量越高。700和550 μmol·mol-1处理下,3种秋眠类型的苜蓿平均叶绿素含量较对照平均分别提高了约11.49%和6.00%,可溶性糖含量平均分别提高了约52.01%和38.82%。CO2浓度升高能够降低苜蓿的丙二醛含量,700和550 μmol·mol-1处理下,丙二醛含量较照平均分别下降了约18.20%和17.93%。盛花期时,CO2浓度升高对脯氨酸合成量有显著的正效应( P<0.05),其余时间呈抑制状态。综合来说,CO2浓度升高在初花期时对苜蓿各生理指标均有显著影响( P<0.05)。高CO2浓度处理下,极非秋眠型苜蓿UC-1465的叶绿素累计合成量高于秋眠型苜蓿Maverick和半秋眠型苜蓿ABI700,而高CO2浓度大大促进了秋眠型苜蓿Maverick、半秋眠型苜蓿Maverick合成可溶性糖、降低丙二醛,有利于增强其缓解胁迫以及渗透调节能力。

关键词: CO2浓度; 秋眠型苜蓿; 生理指标; 叶绿素
中图分类号:S816;S541+.1;Q945.79 文献标志码:A 文章编号:1001-0629(2016)8-1550-10 doi: 10.11829/j.issn.1001-0629.2016-0128
Effect of different CO2 concentrations on physiological responses of fall-dormant alfalfa
Zhai Xiao-meng1, Wang Tie-mei2, Guan Xiao1, Zhang Xiao-bo3
1.State Key Laboratory of Environmental Criteria and Risk Assessment, Chinese Research Academy of Environmental Sciences, Beijing 100012, China
2.Forestry College of Beijing Forestry University, Beijing 100083, China
3.Tourism College of Hainan University, Haikou Hainan 570228, China
Corresponding author: Guan Xiao E-mail:[email protected];Zhao Xiao-bo E-mail:[email protected]
Abstract

To study the physiological changes process of three types of fall dormancy alfalfa under three CO2 concentration (700 μmol·mol-1, 550 μmol·mol-1 and control 350 μmol·mol-1) in open-top chambers during the whole growth period. The results showed that: the CO2 concentration higher, the chlorophyll content and the content of soluble sugar higher of the whole growth period. The chlorophyll content was increased by an average of about 11.49%, 6.00%; soluble sugar content was increased by an average of 52.01%, 38.82% with 700 and 550 μmol·mol-1 treatment. The MDA content decreased by an average of approximately 18.20%, 17.93% with 700 and 550 μmol·mol-1 treatment. The elevated CO2 concentration had a significant positive effect on the synthesis of proline content at flowering ( P<0.05) and the rest of the time was inhibited. In summary, CO2 concentration had a significantly effect on physiological indices of alfalfa at the early flowering ( P<0.05). The chlorophyll synthesis cumulative amount of UC-1465 (non-fall dormancy alfalfa) higher than Maverick (fall dormancy alfalfa) and ABI700 (semi fall dormancy alfalfa) under high CO2 concentrations. And high CO2 concentration is more favorable for Maverick (fall dormancy alfalfa), ABI700 (semi fall dormancy alfalfa) to accumulate soluble sugar and reduce MDA content, it is very likely to enhance the capacity of ease stress and osmotic adjustment.

Keyword: CO2 content; types of dormancy alfalfa; chlorophyll concentration; physiological

大气中CO2浓度逐年升高已成不争的事实, 预计到21世纪中期, CO2浓度将达到550 μ mol· mol-1; 21世纪末, CO2浓度将为700~980 μmol·mol-1[1-2]。目前, 多数研究围绕着温室气体浓度上升和增温效应对植物的耐寒抗旱、产量或者生态系统的稳定性研究而展开[3, 4], 但对植物的生理活动研究较少。叶绿素是植物光合作用吸收光能的重要光合色素, 有研究表明, 高CO2浓度能够促进植物叶片中叶绿素含量明显增加[5, 6, 7], 但也有相反的研究结论, 如CO2浓度升高导致白桦(Betula platyphylla)叶绿素含量明显降低[8]。CO2加富情况下, 拟南芥(Arabidopsis thaliana)、菊花(Chrysanthemum)、大豆(Glycine max)、红掌(Anthurium andraeanum)等的可溶性糖含量上升, 促进部分植物累积更多的非结构性碳水化合物总量(TNC)、淀粉、可溶性蛋白等[9, 10, 11, 12]。高CO2浓度可使5种温带草原植物的淀粉、可溶性糖和TNC含量分别显著提高53%、25%和40%左右(P< 0.05)[1, 2]。有人认为, 长期高CO2浓度处理下, 植物叶片中的叶绿素含量会下降, 因为植物叶片积累了大量的糖分抑制了叶绿素相关基因的转录, 或是被TNC稀释了[13]。在大气中CO2浓度倍增的长期作用下, 淀粉粒积累量越大, 越挤压类囊体膜, 叶绿体的物理损伤导致叶片叶绿素含量增加减缓[14]。此外, 高CO2浓度还能降低植物体内MDA含量[6, 7]。可见, CO2浓度对植物生理指标含量的影响, 不仅与植物的不同生长发育期有关, 还与植物的种属性特异性有关, 且不同的研究其结果不一致, CO2浓度对植物的影响程度至今不能得出一致的结论。

苜蓿(Mdicago sativa)被誉为“ 牧草之王” , 是我国栽培历史悠久、分布范围广泛的优质豆科牧草之一, 它不仅产量高、适口性好、营养丰富, 并且具备生物固氮、固土护坡、改土培肥和植物修复的能力[14]。秋眠性(fall-dormant, FD)是苜蓿的生长习性和生理功能遗传特性, 苜蓿是一种长日照植物, 随着日照时数减少、温度下降, 苜蓿逐步由向上生长转为匍匐生长的状态, 植株高度变低, 最终总产量减少。这种现象一般只在秋季苜蓿刈割再生时才可以观测到。具有这种特性的为秋眠型苜蓿, 反之为非秋眠型苜蓿[15]。按照秋季苜蓿对光温的响应程度, 美国科学家对苜蓿秋眠等级进行划分, 设定了秋眠性11级分类法, 共有四大类, 包括秋眠型(1、2、3), 半秋眠型(4、5、6), 非秋眠型(7、8、9)和极非秋眠型(10、11)[16]。本研究选取3种秋眠类型苜蓿为材料, 探讨其在不同CO2浓度条件下叶绿素、丙二醛、可溶性糖和脯氨酸含量等生理指标的变化, 旨在深入了解未来大气CO2浓度升高对不同秋眠类型苜蓿的生长代谢活动的影响, 以期为生产上筛选适宜的秋眠类型苜蓿提供理论参考。

1 材料与方法
1.1 供试材料

供试苜蓿品种Maverick、ABI700和UC-1465分别为秋眠型、半秋眠型和极非秋眠型, 对应的休眠等级分别为1、6、和11, 均由北京林业大学提供。Maverick简称FD1, ABI700简称FD6, UC-1465简称FD11。

1.2 试验设计

本研究在中国环境科学研究院北京市顺义区试验站完成, 该站位于北京市赵全营镇白庙村, 地理位置38° 39'27.97″ N, 104° 04'58.66″ E, 海拔28.5 m, 年平均温度11.2 ℃, 年日照时数约2 750 h, 年平均无霜期为180 d, 年平均降水量为695.4 mm, 属暖温带半湿润气候。试验在开顶式气室(open-top chamber, OTC)中进行(图1), 气室均由框架、无色透明玻璃、通风管道、过滤器和数据采集系统等构成, 气室为八边形铁管框架结构, 高2.4 m, 边长1.15 m, 整体体积为16 m3。研究共设两个处理组[(700± 100) 和(550± 100) μ mol· mol-1]及一个对照组[大气环境CO2浓度, (350± 50) μ mol· mol-1, CK), 研究期间处理组24 h通入纯度为99.9%的CO2。每个处理4个重复, 每个重复8个花盆(花盆口径17 cm, 高12 cm), 每盆10株苜蓿。盆栽土壤条件为V腐质土:V黄绵土:V蛭石=1:1:1, 保证整个生长期土壤水分充足(0-20 cm土层土壤含水量平均值在40%~45%), 于5月5日播种开始试验, 然后分别于分枝期(6月9日)、初花期(7月18日)、盛花期(8月19日)和成熟期(9月28日)取样测定。

图1 OTC正面结构示意图Fig.1 OTC positive structure’ s schematic diagram

1.3 研究方法

叶绿素:选取健康的完全展开叶片, 用SPAD-502便携式叶绿素测定仪测定其叶绿素含量。每个处理取叶片30片, 每个生育期各测一次。

丙二醛(MDA)用硫代巴比妥酸法进行测定; 可溶性糖(SS)用蒽酮法进行测定; 脯氨酸(Pro)用酸性茚三酮比色法进行测定。试剂配置、具体操作按照文献[16, 17, 18]进行。每个处理重复3次, 每个生育期取叶片测定一次[17]

1.4 数据分析

试验数据采用Excel进行处理, 利用SPSS18.0统计软件进行显著性检验和相关性分析。用单因素方差分析(One-way ANOVA)检验各处理间性状的差异, 各组值的比较采用Duncan法检验(P< 0.05)。线性回归分析检测各指标之间的相关性, 处理前对试验数据进行倒数转换, 使其符合正态分布。

2 结果与分析
2.1 不同CO2浓度对苜蓿叶绿素含量的影响

除盛花期外, CO2浓度对3种秋眠型苜蓿的叶绿素含量有极显著影响(P< 0.01)(表1)。高CO2浓度处理组苜蓿叶绿素含量基本均高于CK组(图2)。从分枝期至初花期, 苜蓿的叶绿素含量呈现下降趋势。

图2 苜蓿叶绿素在不同CO2浓度下的变化
注:同一品种不同小写字母表示不同处理间差异显著(P< 0.05)。下同。
Fig.2 Effects of CO2 concentration on the chlorophyll content of alfalfa
Note: Different lower case letters within the same variety mean significant difference among different treatments at 0.05 level. The same below.

盛花期时, 叶绿素含量均达到最大值:700、550 μ mol· mol-1和CK组下, FD1叶绿素含量(SPAD)分别为62.05、57.99和57.57; FD6的叶绿素含量(SPAD)分别为64.09、58.25和56.09; FD11的叶绿素含量(SPAD)分别为60.13、63.28和61.45。成熟期, 苜蓿的叶绿素含量大幅度下降。本研究中, 0-75 d(5月5日-7月24日)试验阶段高CO2浓度处理下苜蓿叶绿素累积量增加, 75-150 d(7月25日-10月7日)试验阶段高CO2浓度处理下叶绿素合成速度减缓, 且0-75 d试验阶段高CO2短期处理下相同苜蓿品种的叶绿素含量均高于对照组。

2.2 不同CO2浓度对苜蓿丙二醛含量的影响

整个生育期, 3种苜蓿的MDA含量均呈现先升高再降低又升高的趋势, 盛花期降到最低, 成熟期又有上升(图3)。初花期, 高CO2浓度显著抑制苜蓿MDA的合成(P< 0.05)。700、550 μ mol· mol-1组FD1的MDA含量较CK组下降幅度分别为51.50%、46.54%, FD6的MDA含量下降幅度分别为61.64%、57.20%, FD11的MDA含量下降幅度分别为52.78%、55.44%。

图3 不同CO2浓度对苜蓿丙二醛的影响Fig.3 Effects of CO2 concentration on MDA content of alfalfa

整个生育期, 高CO2浓度处理下FD1的MDA含量较CK组平均下降了23.70%~23.54%, FD6的MDA含量较CK组平均下降了16.42%~18.15%, FD11的MDA含量平均下降了11.94%~14.63%, 3个苜蓿品种MDA含量降低幅度的大小排序为FD1> FD6> FD11。综合来看, 700 μ mol· mol-1组3种秋眠型苜蓿的平均MDA含量较CK组约下降了18.20%, 550 μ mol· mol-1组3种秋眠型苜蓿的MDA含量约下降了17.93%, CO2浓度越高, 苜蓿的MDA含量越低。

2.3 不同CO2浓度对苜蓿可溶性糖含量的影响

整个生育期, 苜蓿的SS含量变化与MDA变化趋势基本一致, 也呈先升高后降低再升高的变化趋势。方差分析表明(表1), 分枝期和初花期, CO2浓度对苜蓿SS合成分别有极显著(P< 0.01)和显著(P< 0.05)影响。

表1 CO2浓度对苜蓿各生理指标含量的方差分析与F Table 1 One-way ANOVA results and F-values of each physiological index content at three atmospheric CO2 of three types of fall dormancy

在分枝期时, FD1的SS含量在700 μ mol· mol-1CO2浓度处理下显著高于550 μ mol· mol-1处理和CK组(P< 0.05)(图4)。初花期和盛花期, FD1苜蓿的SS含量在700、550 μ mol· mol-1组处理下均显著高于CK组的(P< 0.05)。整个生育期, 700 μ mol· mol-1组苜蓿的SS含量较CK组平均上升了52.01%; 550 μ mol· mol-1组苜蓿的SS含量较CK组平均上升了38.82%, CO2浓度越高, SS含量越高。整个生育期, 高CO2浓度更利于FD1、FD6积累SS含量, FD1的平均SS含量较CK组增加了65.99%~104.48%, FD6的平均SS含量较CK组增加了21.08%~31.82%。

图4 不同CO2浓度对苜蓿可溶性糖的影响Fig.4 Effects on the SS content of Alfalfa under three CO2 concentration

2.4 不同CO2浓度对苜蓿脯氨酸含量的影响

分枝期CO2浓度对Pro含量无显著影响(P> 0.05)。初花期, 苜蓿的Pro含量均急速上升, 此时CO2浓度对苜蓿Pro含量均有显著的抑制作用(P< 0.05), CO2浓度越高, Pro含量越低。700 μ mol· mol-1组FD1、FD6、FD11的Pro含量较CK组分别显著下降了33.83%、36.73%、40.40%(P< 0.05), 550 μ mol· mol-1组FD1、FD6、FD11的Pro含量较CK组分别显著下降了26.38%、27.35%、23.73%(P< 0.05)。盛花期, 苜蓿Pro含量随CO2浓度降低呈下降趋势, CO2浓度对苜蓿Pro合成量有显著的正效应(P< 0.05)。高CO2浓度处理下, 苜蓿的 Pro含量高于CK组, 其中700 μ mol· mol-1组, 3种秋眠型苜蓿的Pro含量上升了30.47%~86.42%, 550 μ mol· mol-1组, 3种秋眠型苜蓿的Pro含量上升了35.17%~43.30%。成熟期时, 700 μ mol· mol-1浓度处理下FD1、FD6和FD11的Pro含量均降低。

图5 不同CO2浓度对苜蓿游离脯氨酸的影响Fig.5 Effects on the Pro content of alfalfa under three CO2 concentration

3 讨论与结论

本研究中, 短期(0-75 d)高CO2浓度处理下, 相同苜蓿品种的叶绿素含均高于对照组, 700和550 μ mol· mol-1处理下, FD1叶绿素含量分别提高了3.46%和2.40%, FD6分别提高了12.62%和9.34%, FD11分别提高了15.20%和11.27%。CO2浓度升高促进苜蓿叶绿素含量提高。在大气CO2浓度倍增至700 μ mol· mol-1的情况下, 大豆(Glycine max)单位鲜重叶绿素含量提高了323.3 μ g· g-1, 单位叶面积的叶绿素含量提高了6.72 μ g· cm-2(P< 0.01)[19]。升高CO2浓度(+300 μ mol· mol-1)可提高桑叶(Morus alba)的可溶性糖含量[20], 700~750 μ mol· mol-1CO2浓度处理下苜蓿的光合色素含量增加, 光合效率增强, 且有效降低了MDA和Pro含量, 缓解环境胁迫[21, 22]。高CO2浓度处理下, FD11的叶绿素累计合成量高于FD1和FD6的, 因此在高CO2浓度处理下, 极非秋眠型苜蓿对光能的捕获能力大于秋眠型和半秋眠型苜蓿, 储藏更多的碳同化能量, 最终可能大大提高其光合速率[23], 但植物在高CO2浓度生长中会出现“ 光合适应” 现象, 长期CO2浓度升高使得植物的源-库平衡调节机制失衡, 降低光合作用相关的酶或蛋白的表达量[21]。本研究中, 短期(0-75 d)高CO2浓度处理下苜蓿叶绿素累积量增加, 长期(75-150 d)高CO2浓度处理下叶绿素合成速度减缓。有研究表明, 大气CO2浓度的提高可使绿豆(Vigna radiata)生育期早期叶绿素含量增加, 鼓粒期后叶绿素含量下降了1.53%~14.21%[24]。可以推测, 在未来高CO2浓度大气中, 苜蓿或者大部分植物初期植物生长迅速, 物质量积累丰富; 后期生长速度减缓甚至某些植物发生衰退现象。本研究中, 高CO2浓度升高能够促进苜蓿的可溶性糖含量上升, 抑制丙二醛合成。多数研究证明, 高CO2浓度具有明显的“ 施肥效应” , 能促进植物提高光合效率[25], 增加其碳水化合物含量[10], 提高其干物质量[26, 27, 28], 减缓逆境胁迫[29, 30]。整个生育期, 高CO2浓度更利于FD1、FD6积累可溶性糖含量。可溶性糖与植物的抗逆性渗透调节高度相关, 推测高CO2浓度可能有利于秋眠型和半秋眠型苜蓿增强其渗透调节能力和抗逆性。

本研究中, 初花期苜蓿叶绿素含量与MDA含量呈显著负相关(r=-0.28, P< 0.05), 这可能与采样时间处于夏季有关。高温抑制时, 光合色素发生氧化反应, 叶绿素的合成受到极大的抑制, 同时MDA含量不断增加, 降低了苜蓿的叶绿素的含量[20]。初花期和成熟期时, CO2浓度升高降低了其Pro含量(P< 0.01), 且Pro与MDA含量呈负相关(r=-0.76), 而盛花期时, 高CO2浓度能促进苜蓿的Pro含量增高(P< 0.05), 且Pro与叶绿素含量呈显著正相关(r=0.65, P< 0.05)。这和游离脯氨酸的生理作用有很大的关系:1)脯氨酸可以作为渗透调节物质, 平衡细胞代谢, 抵御逆境[31]。初花期和成熟期环境温度异常, 此时植物体内超氧自由基积累增多, 细胞膜过氧化程度严重, MDA含量较大[32], 因此, 初花期和成熟期高CO2浓度下苜蓿的Pro含量降低。2)游离脯氨酸可以参与叶绿素合成[31]。本研究中盛花期苜蓿的叶绿素含量达到最高, 因此, 可能此时CO2浓度升高促进Pro含量升高, 与叶绿素的合成有很大的联系。

The authors have declared that no competing interests exist.

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