松针多糖购自陕西西安文竹生物有限公司(批号:479-30-6), 为黄色粉末, 经实验室采用蒽酮硫酸比色法测定多糖的含量为69%。

选取体重相近的1日龄健康的815肉仔鸡240只, 采用单因素试验设计, 随机分成4个处理, 每个处理4个重复, 每个重复15只。以基础日粮为对照组, 各试验处理组分别在基础饲粮中添加0.05%、0.10%和0.15%的松针多糖。饲养期42 d, 分为前期(1-21 d)和后期(22-42 d)两个阶段。基础日粮参考美国国家研究委员会(NRC)《家禽营养需要》(1994)和中国鸡饲养标准(2004)黄羽肉鸡仔鸡的营养需要配制, 日粮配方与营养水平见表1。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 日粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis) 原料 Ingredient 前期(1-21 d) Early stage (1-21 d) 后期(22-42 d) Late stage (22-42 d) 营养水平② Nutrient level 前期(1-21 d) Early stage (1-21 d) 后期(22-42 d) Late stage (22-42 d) 玉米Corn 56.31% 58.31% 代谢能 ME 12.44 MJ· kg-1 12.50 MJ· kg-1 豆粕Soybean meal 36.17% 34.17% 粗蛋白质 CP 21.95% 21.15% 鱼粉Fish meal 2.00% 2.00% 钙 Ca 0.75% 0.72% 大豆油Soybean oil 2.00% 2.00% 总磷 TP 0.49% 0.47% 石粉Limestone 1.38% 1.38% 有效磷 AP 0.35% 0.33% 磷酸氢钙CaHPO4 0.74% 0.74% 赖氨酸 Lys 1.00% 0.94% 食盐NaCl 0.40% 0.40% 蛋氨酸 Met 0.37% 0.36% 预混料①Premix 1.00% 1.00% 合计Total 100.00% 100.00% Note: ①the premix provided per kg of feed: VA 10 000 IU, VD3 2 000 IU, VE 26 mg, VK 2 mg, VB1 5 mg, VB12 0.01 mg, niacin 40 mg, biotin 0.2 mg, pantothenic acid 15.6 mg, folic acid 5.5 mg, choline 100 mg, Cu 21 mg, Fe 113 mg, Zn 131 mg, Mg 106 mg, Se 0.6 mg, I 0.4 mg. ②nutrient level is calculated. 注:①预混料中为每千克日粮中提供维生素A 10 000 IU, 维生素D3 2 000 IU, 维生素E 26 mg, 维生素K 2 mg, 维生素B1 5 mg, 维生素B12 0.01 mg, 尼克酸40 mg, 生物素0.2 mg, 泛酸15.6 mg, 叶酸5.5 mg, 氯化胆碱100 mg, 铜21 mg, 铁113 mg, 锌131 mg, 锰106 mg, 硒0.6 mg, 碘0.4 mg。 ②各营养水平均为计算值。

表1 日粮组成及营养水平(风干基础) Table 1 Composition and nutrient levels of basal diets (air-dry basis)

4个处理组的肉鸡全期采用笼养的方式, 雏鸡自由采食与饮水, 鸡舍内光照、温度和湿度严格按照常规饲养管理要求进行, 育雏期辅以人工保温。免疫程序一致, 分别在7、14、21 d早上08:00对鸡进行新城疫与法氏囊免疫。采用饮水免疫, 严格按照说明书推荐量添加, 接种疫苗前一天24:00断水。每日观察试验鸡的精神状态、采食及粪便情况, 记录死亡只数。

1.4.1 生长性能指标 试验分别于第21、42天早晨逐只空腹称重, 称重前一天20:00禁食, 自由饮水。于次日08:00逐只称重, 记录饲料消耗量。

试验过程中详细记录各组鸡的健康状况和各阶段的采食量, 并观察鸡群的变化。计算平均日采食量(ADFI)、平均体重(ABW)、平均日增重(ADG)和料重比(F/G)。

1.4.2 免疫器官指数和血清免疫指标 试验分别在第21、42天选取每个重复两只接近平均体重的鸡进行屠宰, 屠宰时断颈静脉采血, 制备血清样品于-20℃保存。摘取脾脏、胸腺、法氏囊, 剔除脂肪后称鲜重。然后计算脾脏指数、胸腺指数、法氏囊指数。血清中白细胞介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子(TNF-α )和胸腺素的含量采用酶联免疫法^{[10, 11]}测定。白细胞介素2试剂盒购自南京建成生物公司(批号20141048457), 肿瘤坏死因子试剂盒购自南京建成生物公司(批号20141049025), 胸腺素试剂盒购自南京建成生物公司(批号20141053224)。

免疫器官指数=免疫器官重量/活体重× 100%。

采用SPSS 17.0统计软件对各数据进行单因素方差分析(One-way ANOVA)和多重比较(Duncan’ s法), 试验数据以“ 平均值± 标准差” 来表示。

松针多糖对肉鸡的平均体重无显著影响(P> 0.05); 但在生长后期, 多糖组的平均体重都高于对照组, 其中0.10%多糖组平均体重最高(表2)。在前期, 对照组的平均日增重最高; 到了生长后期, 多糖组的平均日增重都高于对照组, 0.10%多糖组最高, 显著高于对照组(P< 0.05)。在前期, 松针多糖组的平均日采食量均高于对照组; 但在后期则低于对照组, 但各组之间采食量差异不显著(P> 0.05)。松针多糖组料重比前期高于对照组(P> 0.05), 后期低于对照组(P> 0.05)。从全期来看, 0.10%松针多糖组的平均日增重最高, 料重比最低。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 松针多糖对肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of pine needles polysaccharide on growth performance of broilers 项目 Item 指标 Indexe 松针多糖添加水平Supplemental level of pine needles polysaccharide 0(CK) 0.05% 0.10% 0.15% 前期 Early stage (1-21 d) 平均体重 Average body weight/g 257.20± 9.89 245.25± 7.04 245.63± 9.14 248.41± 12.46 平均日增重 Average daily gain/g 11.01± 0.96 9.70± 0.74 9.97± 1.05 10.57± 1.02 平均日采食量 Average daily feed intake/g 18.39± 0.23 18.51± 0.14 18.46± 0.31 18.47± 0.14 料重比 Feed gain ratio 3.25± 0.10 3.4± 0.13 3.39± 0.13 3.35± 0.17 后期 Later stage (22-42 d) 平均体重 Average body weight /g 819.70± 48.84 828.29± 39.29 874.85± 35.18 846.77± 51.19 平均日增重 Average daily gain/g 22.84± 1.45b 23.60± 1.02ab 25.25± 1.12a 24.01± 1.64ab 平均日采食量 Average daily feed intake/g 40.81± 2.49 38.93± 2.50 39.78± 1.96 40.29± 2.33 料重比 Feed gain ratio 2.74± 0.16 2.56± 0.11 2.47± 0.15 2.64± 0.35 全期 Whole stage (1-42 d) 平均日增重 Average daily gain/g 23.60± 1.28 23.36± 2.96 24.19± 2.52 23.59± 2.53 平均日采食量 Average daily feed intake/g 29.60± 0.13 28.42± 0.06 29.12± 0.08 29.38± 0.13 料重比 Feed gain ratio 2.96± 0.16 2.84± 0.45 2.73± 0.25 2.92± 0.25 Note: Different capital and lower case letters within the same row mean significant difference at 0.01 and 0.05 level, respectively, and no letter mean no significant difference at 0.05 level. The same below. 注:同行不同大、小写字母分别表示差异极显著(P< 0.01)和显著(P< 0.05), 无字母表示差异不显著(P> 0.05)。下表同。

表2 松针多糖对肉鸡生长性能的影响 Table 2 Effects of pine needles polysaccharide on growth performance of broilers

所有屠宰的肉仔鸡免疫器官外观未见异常(表3)。21日龄时, 随着多糖添加水平的提高, 多糖组的脾脏指数也有缓慢的提高, 但差异不显著(P> 0.05)。在42日龄时, 0.10%多糖组的脾脏指数最高, 而0.05%多糖组和0.15%多糖组均低于对照组(P> 0.05)。松针多糖对肉鸡的各组胸腺指数均无显著影响(P> 0.05)。21日龄时, 0.10%多糖组的胸腺指数最高; 在42日龄时, 试验组的胸腺指数均低于对照组(P> 0.05), 以0.10%多糖组的胸腺指数与对照组的最为接近。随着饲养日龄的增加, 法氏囊指数呈现逐渐减少的趋势, 并且各组法氏囊指数均无显著差异(P> 0.05)。在21日龄时, 多糖组中0.10%多糖组的法氏囊指数最高, 0.05%多糖组次之; 42日龄时, 0.05%多糖组的法氏囊指数最高, 而0.10%多糖组和0.15%多糖组的法氏囊指数均低于对照组。

表3

Table 3

表3(Table 3)

表3 松针多糖对肉鸡脾脏、胸腺、法氏囊指数的影响 Table 3 Effects of pine needles polysaccharide on spleen, thymus and fabricius indices of broilers 项目 Item 日龄 Day of age/d 松针多糖添加水平Supplemental level of pine needles polysaccharide 0(CK) 0.05% 0.10% 0.15% 脾脏指数 Spleen index 21 0.09± 0.01 0.10± 0.01 0.10± 0.02 0.13± 0.02 42 0.17± 0.06 0.16± 0.03 0.18± 0.04 0.15± 0.02 胸腺指数Thymus index 21 0.44± 0.16 0.43± 0.13 0.50± 0.13 0.47± 0.17 42 0.64± 0.15 0.52± 0.11 0.63± 0.23 0.52± 0.10 法氏囊指数Fabricius index 21 0.47± 0.07 0.48± 0.16 0.50± 0.09 0.45± 0.06 42 0.36± 0.17 0.40± 0.28 0.35± 0.11 0.36± 0.07

表3 松针多糖对肉鸡脾脏、胸腺、法氏囊指数的影响 Table 3 Effects of pine needles polysaccharide on spleen, thymus and fabricius indices of broilers

血清中的IL-2的浓度后期大于前期, 0.05%多糖组IL-2最高, 21日龄时, 0.05%多糖组IL-2的浓度极显著高于对照组(P< 0.01)(表4)。42日龄时, 各组无显著差异(P> 0.05), 其中0.15%多糖组IL-2的浓度高于其它各组。TNF-α 的浓度前期大于后期。在21日龄时, 各组TNF-α 的浓度无显著差异(P> 0.05), 0.05%多糖组TNF-α 的浓度最高。42日龄时, 0.05%多糖组TNF-α 浓度显著高于对照组(P< 0.05)。在21日龄时, 各组胸腺素浓度无显著差异(P> 0.05), 0.05%多糖组胸腺素浓度最高。42日龄时, 试验组的胸腺素浓度均高于对照组, 0.05%多糖组的胸腺素浓度最高, 比对照组提高了49.50%。

表4

Table 4

表4(Table 4)

表4 松针多糖对肉鸡IL-2、TNF-α 、胸腺素含量的影响 Table 4 Effects of pine needles polysaccharide on IL-2, TNF-α and thymosin concentration of broilers 项目 Item 日龄 Day of age/d 松针多糖添加水平Supplemental level of pine needles polysaccharide 0 0.05% 0.10% 0.15% 白细胞介素2 IL-2/ng· mL-1 21 0.07± 0.07Bb 0.20± 0.06Aa 0.07± 0.06Bb 0.09± 0.06Bb 42 0.23± 0.03 0.24± 0.02 0.22± 0.03 0.24± 0.04 肿瘤坏死因子TNF-α /ng· mL-1 21 0.05± 0.023 0.06± 0.01 0.06± 0.004 0.06± 0.01 42 0.04± 0.01b 0.05± 0.01a 0.04± 0.01b 0.04± 0.003b 胸腺素 Thymosin/ng· mL-1 21 1.85± 0.63 2.23± 0.66 1.13± 0.51 1.29± 0.71 42 0.71± 0.15 1.05± 0.52 0.94± 0.26 0.95± 0.30

表4 松针多糖对肉鸡IL-2、TNF-α 、胸腺素含量的影响 Table 4 Effects of pine needles polysaccharide on IL-2, TNF-α and thymosin concentration of broilers

有研究表明, 在肉鸡饲粮中添加松针粉可显著降低料重比, 提高平均日增重, 对肉鸡生产有促进作用^{[12, 13]}。这可能与松针粉中含有植物多糖活性成分密切相关。多糖类物质能够促进核酸和蛋白质的合成, 对机体特异性免疫与非特异性免疫、细胞免疫与体液免疫均有重要影响, 具有重要的生物学和生理学功能, 尤以对动物免疫调控作用突出^[14]。日粮中添加2%的红酒香菇多糖能显著提高肉鸡的生长性能和饲料转化效率^[15]。在饲粮中添加1%的黄芪多糖可提高肉鸡平均日增重, 平均日采食量, 降低料重比^[16]。植物多糖改善动物生长性能的机制可能是通过增强机体的免疫力, 提高肠道内有益菌群的数量, 使营养物质容易被吸收利用^[17]。本研究结果表明, 在饲粮中添加0.10%的松针多糖组, 能提高肉仔鸡的体重和日增重, 降低料重比, 对肉鸡生产有促进作用。但从整体来看, 松针多糖组的平均日采食量要低于对照组, 这可能与多糖提取物对肉鸡采食量有一定程度的抑制作用相关。有些研究证实, 多糖提取物对动物采食量及饲料转化率有一定的负面影响, 其原因是多糖通过增加食糜黏度, 妨碍消化酶与营养物质的接触而降低消化利用率^[18]; 较高剂量的多糖因与脂肪络合抑制脂肪吸收, 干扰了机体的正常功能, 导致营养物质供给不足, 进而影响机体的生长, 降低了动物的生长性能^[19]。目前研究可见, 关于多糖对肉鸡生长性能的影响存在争议, 还有待于进一步研究探索。

免疫器官的重量与动物免疫功能密切相关^[20]。家禽的免疫器官主要为胸腺、脾脏和法氏囊等^[21]。胸腺、脾脏和法氏囊的重量可用于评价鸡的免疫状况^{[22, 23, 24]}。多糖可影响免疫器官的发育。饲粮中添加黄芩多糖能提高肉鸡的胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数, 尤其是200 mg· g^-1添加组对各项免疫器官指数的的效果最好^[6]。肉鸡4周龄、7周龄时, 添加1%、3%和5%的松针粉能有效促进肉鸡脾脏、胸腺和法氏囊免疫器官的发育, 尤其是添加 5% 松针粉组效果明显, 7周龄时添加3%松针粉组效果较明显^[25]。本研究结果表明, 0.10%的松针多糖能够提高肉仔鸡的免疫器官指数, 但多糖对免疫器官指数的影响受生长时期、添加剂量和不同器官的影响。

IL-2、TNF-α 和胸腺素是参与肉鸡体液免疫的细胞因子, 它们在血清中含量的多少, 可以间接影响动物的细胞免疫和体液免疫。黄芪多糖复方鸡可以通过调节细胞因子IL-10和IFN-γ 的分泌来提高机体的免疫功能^[26]。黄芪多糖还可以提高血清细胞因子IL-1、IL-2和TNF-α 的含量, 但对其影响呈剂量依赖关系, 血清IL-1 、IL-2和TNF-α 黄芪多糖添加剂量的增加而增加, 当添加量提高到2.0%时, 各试验阶段肉仔鸡血清IL-1、IL-2和TNF-α 含量均有不同程度的降低^[27]。本研究表明, 0.05%松针多糖能够提高生长前期IL-2和生长后期TNF-α 的浓度, 但再增加剂量效果反而下降。