将采自阿拉善地区(38° 68' N, 105° 61' E)的白沙蒿成熟期新鲜叶片, 阴干, 用球磨仪器(MM400, 德国莱驰)粉碎, 通过0.15 mm筛。将叶片细粉用20倍无水乙醇溶液浸泡, 超声波(KX700B, 昆山禾创超声仪器有限公司)提取30 min后, 重复提取2次, 减压浓缩提取液。在阴暗低温和通风较好的地方, 晾干, 制得提取物。

将白沙蒿提取物先用含10%蒸馏水的丙酮(C₃H₆O)液配制成2 mg· mL^-1浓度的母液, 用蒸馏水将母液稀释成1 000、500、333、250和200 μ g· mL^-1浓度的溶液待测。生物测定前加入1%的表面活性剂JFC(C7~C9烷醇聚氧乙烯醚)。

采用玻片浸渍法^[14]。选用采自田间未施药的黄豆(Glycine max)苗上朱砂叶螨雌成螨。用零号毛笔挑选大小一致、体色鲜艳、行动活泼的雌成螨, 利用双面胶将其背部粘在载玻片上, 每片粘3行, 每行粘10头。在温度25 ℃、湿度85%的生化培养箱(RXZ, 宁波江南仪器厂)中放置4 h后, 用双目镜(XSP-BM-2C, 上海光学仪器厂)观察, 剔除死亡或不活泼个体。将带螨玻片的一端浸入不同浓度的白沙蒿提取物溶液中, 轻轻摇动5 s 后取出, 迅速用吸水纸吸干螨体及其周围多余的药液。置于上述生化培养箱中, 24 h后用双目镜检查死亡数, 计算死亡率。用毛笔轻触螨体, 以螨足不动者为死亡。以含10%蒸馏水的丙酮空白溶液稀释同样倍数后加入JFC活性剂作为对照处理。每个浓度测定平行进行3次, 取其平均值。以鱼藤酮(图1)作为活性对照, 因该化合物活性较高, 所以测试浓度从500 μ g· mL^-1开始。

图1

Fig. 1

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	图1 鱼藤酮化学结构式Fig. 1 The chemical structure of rotenone

供试虫种采自田间未施药甘蓝(Brassica olera-cea)上。待其卵孵化后, 选取整齐一致的斜纹夜蛾成虫3龄初孵幼虫供试验用。采用虫体浸渍法。

将白沙蒿提取物配制成10 mg· mL^-1乙醇溶液, 用蒸馏水稀释成500倍和1 000倍。把3龄斜纹夜蛾幼虫放入已配好的白沙蒿提取物乙醇溶液中浸渍3 s后取出, 放在滤纸上自然晾干后, 放入人工气候箱中 (RXZ, 宁波江南仪器厂), 温度 25 ℃, 相对湿度为75%, 日光照14 h用甘蓝叶喂养。单次处理试虫20头, 重复3次, 以稀释的乙醇溶液做空白对照。药后7、10和14 d检查死虫, 针尖触碰虫体无反应即记为死亡。

以常见的作物油菜(Brassica campestris)和牧草苜蓿(Medicago sativa)、(Trifolium pratense)、早熟禾(Poa annua)为试验对象。选用饱满的种子, 在无菌滤纸上培养发芽后, 进行植物毒活性试验^[15]。

选取大小相仿的供试植物放入24孔板中, 加入相同量的无菌水。将白沙蒿提取物分别配置成不同浓度的二甲基亚砜(DMSO)溶液, 相同体积加入到孔板中, 以加入同体积的DMSO为阴性对照, 每个处理重复3次。处理后观察并记录植物生长情况。

油菜培养4 d, 处理3 d; 苜蓿培养3 d, 处理4 d; 红三叶培养4 d, 处理5 d; 早熟禾培养10 d, 处理5 d。

杀虫活性计算公式如下:

相对死亡率=(对照组-处理组)/对照组× 100%。

植物抑制率计算公式如下:

抑制率=(对照组-处理组)/对照组× 100%。

采用SPSS 17.0软件对所测数据统计分析, 用平均值和标准误表示测定结果, 用Duncan法对各测定数据进行多重比较; 采用Excel 2010制图。

白沙蒿提取物对朱砂叶螨表现出较强的杀螨活性(表1)。在浓度为250 μ g· mL^-1时, 杀螨活性接近于50%。经过计算, 鱼藤酮的致死中浓度LC₅₀为0.21 mg· mL^-1, 而白沙蒿提取物LC₅₀为0.31 mg· mL^-1, 在生产实践中具有实际应用价值。

表1

Table 1

表1(Table 1)

表1 白沙蒿提取物和鱼藤酮对朱砂叶螨的杀螨活性 Table 1 The acaricidal activities of Artemisia sphaerocephala and rotenone against Tetranychus cinnabarinus 提取物 Extract 处理浓度Treatment concentration/(μ g· mL-1) 1 000 500 333 250 200 白沙蒿提取物 The extract of A. sphaerocephala/% 73.33± 10.49a 66.67± 8.95b 60.00± 5.06b 46.67± 7.13c 26.67± 3.95d 鱼藤酮Rotenone/% 90.16± 6.27a 73.33± 4.92b 59.24± 3.68c 41.58± 4.69d Different lowercase letters within the same row indicate significant differences at the 0.05 level; similarly for Table 2. 同行不同小写字母表示不同浓度处理间差异显著(P< 0.05)。表2同。

表1 白沙蒿提取物和鱼藤酮对朱砂叶螨的杀螨活性 Table 1 The acaricidal activities of Artemisia sphaerocephala and rotenone against Tetranychus cinnabarinus

白沙蒿提取物对斜纹夜蛾幼虫表现出明显的触杀活性(表2)。结果表明, 在处理10 d后, 浓度为20 μ g· mL^-1时, 杀虫活性大于50%。随着时间的延长, 处理时间大于10 d时, 白沙蒿对该幼虫的触杀活性相对死亡率并没有明显变化。这可能是10 d后, 作为植物提取物, 其主要成分在自然条件下会发生一定程度的变化所致。

表2

Table 2

表2(Table 2)

表2 白沙蒿提取物溶液对斜纹夜蛾幼虫的杀虫活性 Table 2 The insecticidal activities of the extract from Artemisia sphaerocephala against Spodoptera litura 处理浓度 Treatment concentration/ (μ g· mL-1) 处理时间 Time/d 相对死亡率 Relative mortality/% 20 7 18.70± 1.05a 10 51.85± 4.89c 14 58.52± 5.02c 10 7 13.61± 2.54a 10 26.67± 1.63b 14 31.00± 3.16b Different lowercase letters for the same treatment concentrations indicate significant differences among different treatment time at the 0.05 level. 同行不同小写字母表示相同浓度不同处理时间差异显著(P< 0.05)。

表2 白沙蒿提取物溶液对斜纹夜蛾幼虫的杀虫活性 Table 2 The insecticidal activities of the extract from Artemisia sphaerocephala against Spodoptera litura

白沙蒿提取物在200 μ g· mL^-1时, 对油菜有明显的抑制活性, 主要影响其株高的生长, 且抑制率在20%以内; 对苜蓿的鲜重有影响, 抑制率在5%左右; 对红三叶和早熟禾无明显抑制效果(图2和图3)。在较低的浓度下, 该植物的提取物对不同植物的抑制作用均较小, 而且对苜蓿和早熟禾的鲜重和株高有不同程度的促进作用。

图2

Fig. 2

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	图2 白沙蒿提取物对早熟禾的植物毒活性Fig. 2 Phytotoxic activities of the extract obtained from Artemisia sphaerocephala against bluegrass

图3

Fig. 3

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	图3 白沙蒿提取物的植物毒活性Fig. 3 Phytotoxic activities of the extract obtained from Artemisia sphaerocephala